Un nuovo enigma attende il professor Layton e Luke, quando la giovane cantante Janice Quatlane confida loro di aver visto il fantasma della sua migliore amica defunta. Un gentiluomo come il professor Layton non pur lasciare una signora in difficoltà. Per risolverequesto mistero Luke e il professore vanno al Crown Petone, il più celebre teatro d'opera del mondo, dove il geniale compositore Oswald Whistler presenta la sua ultima fatica. Ma qui lo spettacolo si trasforma in un terribile gioco, il cui vincitore otterrà l'immortalità. La chiave del gioco si trova nella vita eterna.